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    青光眼動物模型構(gòu)建

    青光眼動物模型構(gòu)建

    簡要描述:
    青光眼動物模型構(gòu)建:青光眼動物模型是研究眼壓升高、視神經(jīng)損傷及視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGC)死亡機制的核心手段

    更新時間:2025-07-11

    訪問量:159

    廠商性質(zhì):其他

    一、青光眼動物模型構(gòu)建分類與選擇

    1. 高眼壓模型(模擬原發(fā)性開角型青光眼)

    模型類型適用動物造模方法優(yōu)缺點
    激光誘導(dǎo)大鼠、小鼠、兔氬激光光凝房角(需前房注射印度墨汁增強吸收)
    - 參數(shù):50-100 μm光斑,0.1-0.5 s,50-100 mW
    ? 可精確控制眼壓升高幅度
    ? 需熟練操作,可能引發(fā)炎癥反應(yīng)
    微球注射小鼠、大鼠- 前房注射聚苯乙烯微球(10 μm,5-10 μL,阻塞小梁網(wǎng))
    - 可聯(lián)合viscoelastic凝膠延長高眼壓
    ? 操作簡單,眼壓穩(wěn)定維持2-4周
    ? 需定期監(jiān)測眼壓(Tonolab)
    激素誘導(dǎo)兔(新西蘭白兔)- 地s米松滴y液(0.1%,每日2次,持續(xù)4-6周)? 模擬糖皮質(zhì)激素性青光眼
    ? 僅適用于兔,眼壓升高較緩慢

    2. 視神經(jīng)損傷模型(模擬青光眼性視j病變)

    模型類型適用動物造模方法應(yīng)用場景
    視神經(jīng)鉗夾大鼠(SD/Wistar)- 手術(shù)暴露視神經(jīng),用顯微血管夾(壓力50-70 g)夾持5-10秒? 直接模擬軸突損傷
    ? 需開顱操作,損傷不可逆
    NMDA興奮毒性小鼠、大鼠- 玻璃體內(nèi)注射NMDA(20-40 nmol/μL,2 μL)誘導(dǎo)RGC凋亡? 快速誘導(dǎo)RGC死亡(24-72小時)
    ? 不涉及眼壓升高

    3. 遺傳性青光眼模型

    • DBA/2J小鼠:自發(fā)突變導(dǎo)致虹膜萎s、房角關(guān)閉,眼壓逐漸升高(6-12月齡)。

      • 特點:模擬原發(fā)性閉角型青光眼,需長期觀察。

    • Myocilin突變小鼠:過表達人突變MYOC基因(如Tyr437His),誘導(dǎo)小梁網(wǎng)功能障礙。


    二、青光眼動物模型構(gòu)建關(guān)鍵實驗步驟與注意事項

    1. 眼壓監(jiān)測

    • 儀器選擇

      • 小鼠/大鼠:TonoLab或Tono-Pen(需麻醉,如異f烷)。

      • 兔:Goldmann壓平眼壓計(局部麻醉)。

    • 測量頻率:造模后每日或隔日測量,持續(xù)2-4周。

    2. 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGC)評估

    • 標(biāo)記方法

      • 逆行標(biāo)記:上丘注射熒光金(FluoroGold),1周后視網(wǎng)膜鋪片計數(shù)RGC。

      • 免疫染色:Brn3a(RGC特異性標(biāo)記物)+ DAPI核染。

    • 功能檢測

      • 視網(wǎng)膜電圖(ERG):評估視網(wǎng)膜整體功能(需排除角膜混濁影響)。

      • 模式ERG(PERG):特異性反映RGC功能。

    3. 視神j病理分析

    • 軸突計數(shù):視神經(jīng)橫截面透射電鏡(TEM)或甲苯胺藍染色。

    • 膠質(zhì)細胞活化:GFAP免疫組化(星形膠質(zhì)細胞增生標(biāo)志)。


    三、模型驗證與數(shù)據(jù)分析

    1. 成功標(biāo)準

      • 眼壓持續(xù)升高>25 mmHg(小鼠)或>30 mmHg(大鼠)超過7天。

      • RGC數(shù)量減少≥30%(對照眼相比)。

    2. 對照組設(shè)計

      • 假手術(shù)組(僅做角膜穿刺無激光/注射)。

      • 對側(cè)未處理眼(自身對照)。


    四、常見問題與解決方案

    問題可能原因解決方案
    眼壓升高不穩(wěn)定微球阻塞不w全/激光能量不足增加微球濃度或激光功率,重復(fù)操作
    角膜混濁影響檢測激光/注射損傷角膜使用透明角膜膏(如羥丙基甲基纖維素)保護
    RGC標(biāo)記失敗逆行標(biāo)記時間不足延長熒光金擴散時間至7-10天


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