尿路感染模型構(gòu)建

一、尿路感染模型構(gòu)建流程（雌鼠膀胱感染模型）

1. 關(guān)鍵準備

• 特殊器材：24G靜脈留置針（剪去針頭保留軟管段）

• 菌株處理：UPEC菌株（如UTI89）在LB中培養(yǎng)至OD600=0.3（對數(shù)早期，粘附力更強）

• 小鼠預(yù)處理：

• 禁水4小時后腹腔注射速尿（10mg/kg）促進膀胱排空

• 麻醉后使用溫生理鹽水沖洗尿道口

2. 精準接種技術(shù)

1. 將50μL菌懸液（含1%臺盼藍染色驗證）吸入PE-10導(dǎo)管

2. 45度角插入尿道，遇到阻力后回抽0.5cm（確保進入膀胱）

3. 緩慢推注后立即：

• 垂直提起小鼠尾部保持30秒

• 輕壓腹部3次促進細菌分布

3. 感染驗證時間點

• 早期定植：2h后處死檢測膀胱細菌量（應(yīng)＞10^4 CFU）

• 炎癥峰值：24h尿液中白細胞數(shù)可達正常值20倍

• 慢性感染：72h后可見膀胱上皮內(nèi)細菌群落（IBCs）

二、尿路感染模型構(gòu)建創(chuàng)新改良方案

1. 原位生物發(fā)光成像模型

• 接種lux標記菌株（如UTI89-lux）

• 使用IVIS系統(tǒng)動態(tài)監(jiān)測感染進展（需提前脫毛）

2. 精確定量移植模型

• 術(shù)前24h膀胱內(nèi)灌注0.1M鹽酸損傷黏膜

• 接種后2h膀胱灌注D-甘露糖（競爭性抑制細菌清除）

三、關(guān)鍵注意事項

1. 導(dǎo)管選擇對比表：
   | 導(dǎo)管類型 | 適用情況 | 穿孔風險 |
   |---------|----------|----------|
   | 24G留置針 | 常規(guī)模型 | 5-8% |
   | PE-10管 | 慢性模型 | ＜3% |
   | 34G微針 | 幼鼠實驗 | 近乎0 |

2. 菌液配制要點：

• 使用PBS+0.1%明膠作為懸浮劑

• 接種前37℃預(yù)熱避免膀胱痙攣

3. 術(shù)后護理創(chuàng)新：

• 在飲水中添加5%葡萄糖（促進細菌增殖）

• 使用代謝籠分時段收集尿液

四、新型評估技術(shù)

1. 超聲顯微成像：

• 使用Vevo 3100系統(tǒng)監(jiān)測膀胱壁增厚（分辨率達30μm）

2. 微流控芯片檢測：

• 取10μL尿液直接檢測ATP含量（與細菌量正相關(guān)）

3. 三維病理重建：

• 膀胱連續(xù)切片免疫熒光染色后數(shù)字化重構(gòu)

五、常見問題解決方案

• 問題1：接種后尿液反流
  方案：采用"三指壓迫法"（同時按壓恥骨聯(lián)合和雙側(cè)腹股溝）

• 問題2：感染率不穩(wěn)定
  方案：在菌液中添加0.01%粘液素（增強定植）

• 問題3：繼發(fā)腎感染
  方案：接種后立即膀胱灌注2%利多ka因（抑制輸尿管蠕動）