RNA干擾檢測實驗

RNA干擾( RNA interfering，RNAI)現(xiàn)象是指由與靶基因序列同源的雙鏈RNA(DsRNA)弓|發(fā)的基因轉(zhuǎn)錄后的沉默過程，小干擾RNA特異性介導(dǎo)相同序列的mRNA降解，阻斷相應(yīng)基因表達。晶萊生物提供的RAN干擾技術(shù)包括化學(xué)合成小RN段( SiRNA)和構(gòu)建載體RNA ( SnRNA)兩種形式。實驗委托者只需提供干預(yù)基因名稱或基因序列D，設(shè)計合適的干預(yù)位點，保證至少有- -對小RNA有效抑制目的基因表達，抑制效率不低于70%。
RNA干擾( SiRNA實驗)流程
確定干擾基因， 設(shè)計并合成合適的小干擾RNA (片段型或載體型小干擾RNA)。
預(yù)轉(zhuǎn)染實驗，進行細胞培養(yǎng)，摸索轉(zhuǎn)染條件、時間并進行必要的檢測(WB、PCR等)，確定干預(yù)效果的一對小RNA。
第三步正式實驗，設(shè)置合理實驗分組，進行瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
第四步轉(zhuǎn)染后檢測，根據(jù)實驗要求選擇細胞生物學(xué)檢測、蛋白檢測、分子生物學(xué)檢測等。以研究小干擾RNA對于細胞、蛋白或基因功能的影響。RNA干擾( SiRNA實驗)檢測(可根據(jù)委托者實驗需求選擇做)
1.細胞檢測:細胞增殖毒性MTT、細胞凋亡、細胞周期、細胞遷移、細胞侵襲;
2.蛋白檢測:免疫印跡WB、免疫細胞化學(xué)ICC、免疫熒光IF、流式細胞術(shù)FCM、酶聯(lián)免疫EL SIA;
3.分子生物檢測: RT-PCR、實時熒光定里PCR、甲基化特異性PCR(MSP); .
4.其他檢測:生化檢測、酶類檢測、脂類檢測、糖類檢測。